Diabetologia：激活但功能破损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次用到去甲自身毒素到用到1HG肝炎外科呕吐的重大突破部将在老年人时代就有很好的详细描述，多个去甲自身毒素感染性的老年人前有70%在毒素匹配后10年末患上肝炎，而随访15年的老年人这一百分比减少到84%。即便如此之下，分之一外科1HG肝炎一半以上的HG1HG肝炎的肺癌机制还不能得到更好的分析。

愈发多的人开始可用分期系统来界定1HG肝炎的重大突破：变异在用到多种去甲自身毒素时离开第1阶段，用到血糖异常时离开第2阶段，用到呕吐时离开第3阶段。一些多发去甲自身毒素感染性的变异，在1期和2期，重大突破很极快，并演进为肺癌的1HG肝炎。我们前详细描述了一第三组在首次检测到多种去甲自身毒素样品后多于10年无肝炎的极极快重大突破者，这第三组病征人数少，但特征非常清楚。随后，我们注意到去甲自身抗原特异性CD8+T蛋白反应会在重大突破比很极快的病征前必需不共存，但在近期肺癌和依然共存的肝炎病征前很容易检测到。这有可能表明，与重大突破病征即便如此，这些病征致病反应会的调节减弱。

中期分析表明，尽管调节性T蛋白(Treg)总数正常，但肝炎病征共存一些特性毛病，其前有数对IL-2的反应会潜能降低。此外，肝炎病征前的振荡CD4+T蛋白有可能对调节更具抵抗性，展现为振荡T蛋白的抑制作用减弱，自然显现成的Treg和本体外显现成的诱导Treg，以及抗原境遇的CD4+T蛋白前IL-2反应会减弱。本分析的目的是详细描述了CD4+调节性T蛋白(Treg)在一小群极比很极快重大突破者前的特征，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访整整为18-32年。

方法：BOX分析是一项以人群为基础的纵向分析，在21岁以下确诊的病征亲属前检验1HG肝炎的危险心理因素。我们前详细描述了依然比很极快重大突破者的特征，他们保持多重去甲自身毒素感染性最少10年，但不能用到肝炎的外科呕吐，极快性或非完成性致病。随后，10名继续保持无肝炎并情愿提供大量血液样品的比很极快重大突破者扩展到T和B蛋白特性分析方法。在目前的分析前，8名极快重大突破者(SP第三组)，前位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁彼此间的去甲自身毒素感染性。所有的大多数人都所处1HG肝炎重大突破的1期，尽管一些人随后无法控制了去甲自身毒素对某些抗原的感染性反应会，然而，一名病征现在所处2期多于6年，但不能用到外科呕吐，一名病征被病患为肝炎，该人脑72岁，在捕获物理样品时，其HbA1c下降时到53 mmol/mol(7%)，在数据分析方法前对该NAD完成了之外分析方法报告。分离外周血单个核反应会蛋白(PBMCs)，转用多常量流式蛋白忍术和T蛋白抑制作用飞行测试分析方法报告NAD前Treg的频部将、表HG和特性。可用FlowSOM和CITRUS(聚类断定、表征和回归)完成无指导聚类分析方法，分析方法报告Treg表HG。

结果：与肥胖症NAD即便如此，来自极快重大突破本体的思绪CD4+T蛋白的指导聚类表明，激活的思绪CD4+ Treg频部将减少，与糖皮质激素诱导的TNFR关的蛋白(GITR)特别强调减少有关。一名HbA1c下降时的病征与重大突破比很极快者和冗余的比对第三组即便如此，Treg谱有所完全相同。特性分析方法表明，与肥胖症NAD即便如此，来自比很极快重大突破本体的Treg内源性的CD4+振荡T蛋白抑制作用明显受损。展现为对振荡CD4+T蛋白CD25和CD134特别强调的抑制作用减少。

左图1 深入的表HG分析方法表明，CD4+Treg亚HG在极快重大突破链表前减少。由FlowSOM转化成的Treg会议室，挤满在来自所有NAD的活CD4+CD45RA -蛋白上。根据标上物特别强调断定成10个元簇:思绪T蛋白_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;思绪T cell_4;CD49b思绪T蛋白;HLA-DR + GITR +思绪T蛋白;线或程Treg_1;线或程Treg_2;线或程Treg_3;和线或程Treg_4。(a)可用9个完全相同Treg标上转化成的10个元簇的MST。每个终端亦然一个空降兵(100个空降兵)，非常大的元空降兵(10个元空降兵)在终端第三组外面填充。每个终端前的糕点左图说明单个标上的特别强调级别。(b)每个元聚类的热左图，以表明整本体标上特别强调。(c, d)为HD第三组(c)和SP第三组(d)转化成左图，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相非常稀土元素为每个metacluster箱线或左图(稀土元素> 0.05%)确认为HD和SP第三组:线或程Treg_2 (e),线或程Treg_3 (f),线或程Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +思绪T蛋白(h)、思绪T cell_1(i),思绪T cell_2 (j),思绪T cell_3 (k) n d CD49b思绪T蛋白(l)。红色红色亦然理应SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon一组大写秩化验。此键适用于左图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

左图2 可用CITRUS的预测模HG确认，Treg频部将的减少是重大突破比很极快的标志。分级除此以外(a - f)和柑橘分析方法(g-k)非常SP大多数人和冗余的HD大多数人在CD4+CD45RA−T蛋白上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群本体的亦然性左图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3可溶性，然后通过HLA-DR和GITR特别强调完成分离，模拟器FlowSOM群本体。(b) HD(横纹)和SP(蓝点)第三组以及NADSP 606(红色)前CD25+ cd127的频部将汇总左图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+除此以外兄集的箱线或左图;(c) HLA-DRloGITR−(线或程Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(线或程Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(线或程Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+线或程T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋状由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3特别强调气压填充，标记突成的簇被识别为SP和HD链表彼此间的完全相同。(j)箱线或左图表明了在SP(蓝点)和HD(灰点)第三组前，CITRUS思绪Treg_3和Treg_4的相非常稀土元素(百分比)。(k)直方左图表明每个簇的表HG(暗红色)和Treg标上相非常特别强调与背景特别强调(红色);上列，线或程Treg_3;比如说一行，线或程Treg_4。背景与所有其他簇前标上的特别强调有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon一组大写秩化验

左图3 与肥胖症献血者即便如此，重大突破比很极快者思绪treg的GITR减少。每个思绪CD4+T蛋白元簇(思绪T蛋白_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;CD49b +思绪T蛋白;HLA-DR + GITR +思绪T蛋白;线或程Treg_2;线或程Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检测每个特别强调标上的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)链表的特别强调热左图(sp606不有数在内)。(c,d)思绪Treg_4元簇前所有HD(灰色)、所有SP(红色)和SP 606(红色)的FlowSOM GITR特别强调串连，表明直方左图(c)和汇总左图(d)。Wilcoxon一组大写秩和化验，p< 0.07(红色)所有NAD有数，p< 0.05(红色)NADSP 606和冗余的HD不有数在测试前。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs前GITR特别强调，从分级除此以外，从所有HD(灰色)、所有SP(红色)和SP 606(红色)串连，表明直方左图(e)和汇总左图(f) *p< 0.05, Wilcoxon一组大写秩化验

左图4 来自比很极快重大突破的CD4+ treg蛋白控制振荡CD4+T蛋白的潜能降低。SP第三组用红色的线或和红色说明，HD第三组用黑色的线或和红色说明，红色的线或/红色说明NADsp606。可用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白完成分选。CD4+CD25−(转发者)被标上为CFSE, Treg按推论的百分比指示剂。用抗CD3 /28微珠酪氨酸蛋白，人才3过后完成流式蛋白忍术检测。(a-d)与CD4+转发者相非常应的treg人才(自本体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD转发者人才。(a,b,f) CFSE裂解(a,e)和CFSE抑制作用平均值(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑制作用平均值。可用感染性比对(激活的响应蛋白不含treg)计算抑制作用平均值。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析方法。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重非常测试

左图5 振荡CD4+T蛋白对比很极快重大突破的T蛋白酪氨酸的抑制作用更敏感。SP第三组用红色的线或和红色说明，HD第三组用黑色的线或和红色说明，红色的线或/红色说明NADsp606。可用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白完成分选。CD4+CD25−(转发者)被cfsel标上，treg按推论的百分比指示剂。用抗CD3 /28微珠酪氨酸蛋白，人才3过后完成流式蛋白忍术(CD25反染)和蛋白因兄分析方法。HD Treg与HD、SP或sp606转发者共同人才。(a,b) CFSE裂解(a)和CFSE抑制作用百分部将(b)。(c,d) CD25抑制作用百分部将(c)和CD134抑制作用百分部将(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共人才前的特别强调。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析方法。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重非常测试

论证：我们得成的论证是，来自比很极快重大突破兄的酪氨酸思绪CD4+Treg在GITR特别强调前得到了扩展和非常丰富，特别强调了有利于分析Treg在1HG肝炎有可能会变异前的异质性的必要性。

书名原文：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28