Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的处理过程中逐渐扩展

从第一次消失家兔自身血清到消失1DF癌症临床患儿的方面率在孩童时期就有不太好的说明了，多个家兔自身血清无患儿的孩童之前有70%在血清叠加后10年内复发癌症，而随访15年的孩童这一%-增大到84%。远比之下，占临床1DF癌症一半以上的DF1DF癌症的病症程序还并未得不到充分的研究课题。

越来越多的人开始常用分段系统来定义1DF癌症的方面：个躯在消失多种家兔自身血清时转至第1收尾，消失血糖异常时转至第2收尾，消失患儿时转至第3收尾。一些多发家兔自身血清无患儿的个躯，在1期和2期，方面较太快，并发展为病症的1DF癌症。我们先前说明了了一两组在首次验证到多种家兔自身血清抽样后将近10年无癌症的极太快方面者，这两组患儿000人更少，但特征非常完全一致。随后，我们见到家兔自身抗原特异性CD8+T肝细胞反应会在方面缓太快的患儿之前前提不存在，但在最近病症和与此相关的癌症患儿之前很容易验证到。这确实表明，与方面患儿远比，这些患儿自身免疫反应会的调节增强。

晚期研究课题表明，尽管调节性T肝细胞(Treg)数量情况下，但癌症患儿存在一些功能缺陷，其之前最主要对IL-2的反应会并能减小。此外，癌症患儿之前的现象CD4+T肝细胞确实对调节更具抵抗性，表现为现象T肝细胞的抑止减弱，自然显现出新的Treg和躯外显现出新的诱发Treg，以及抗原历程的CD4+T肝细胞之前IL-2反应会减弱。本研究课题的目的是说明了了CD4+调节性T肝细胞(Treg)在一小群极缓太快方面者之前的特征，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法有：BOX研究课题是一项以人群结合的平行研究课题，在21岁不限住院的患儿亲属之前检查1DF癌症的危险环境因素。我们先前说明了了长期缓太快方面者的特征，他们始终保持多重家兔自身血清无患儿最多10年，但并未消失癌症的临床患儿，太快性或非顺利进行性自身免疫。随后，10名继续始终保持无癌症并愿意提供大量血液抽样的缓太快方面者纳入T和B肝细胞功能深入研究课题。在目前的研究课题之前，8名太快方面者(SP两组)，之前位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁间的家兔自身血清无患儿。所有的举例来说都正处于1DF癌症方面的1期，尽管一些人随后保住了家兔自身血清对某些抗原的无患儿反应会，然而，一名患儿已经正处于2期将近6年，但并未消失临床患儿，一名患儿被诊断为癌症，该受试者72岁，在采集实验抽样时，其HbA1c上升时到53 mmol/mol(7%)，在数据深入研究课题之前对该ADP顺利进行了前提上指标。分离外周血单个核肝细胞(PBMCs)，采用多参数流式肝细胞绝技和T肝细胞抑止次测试指标ADP之前Treg的基频、表DF和功能。常用FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、连续性和紧接)顺利进行无监督聚类深入研究课题，指标Treg表DF。

结果：与有益ADP远比，来自太快方面躯的清醒CD4+T肝细胞的监督聚类推测，激活的清醒CD4+ Treg基频增大，与持续性诱发的TNFR相关蛋白(GITR)强调增大有关。一名HbA1c上升时的患儿与方面缓太快者和给定的解读两组远比，Treg曲谱各不相同。功能深入研究课题表明，与有益ADP远比，来自缓太快方面躯的Treg内源性的CD4+现象T肝细胞抑止引人注意受损。表现为对现象CD4+T肝细胞CD25和CD134强调的抑止增大。

所示1 深入的表DF深入研究课题推测，CD4+Treg亚DF在太快方面队列之前增大。由FlowSOM聚合的Treg室，聚集在来自所有ADP的活CD4+CD45RA -肝细胞上。根据上面物强调鉴定出新10个元簇:清醒T肝细胞_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;清醒T cell_4;CD49b清醒T肝细胞;HLA-DR + GITR +清醒T肝细胞;CPUTreg_1;CPUTreg_2;CPUTreg_3;和CPUTreg_4。(a)常用9个不同Treg上面聚合的10个元簇的MST。每个链表亦然一个集群(100个集群)，更大的元集群(10个元集群)在链表两组周围手绘。每个链表之前的碗所示对此单个上面的强调级别。(b)每个元聚类的热所示，以推测整躯上面强调。(c, d)为HD两组(c)和SP两组(d)聚合所示，以及FlowSOM比对的每个元簇的很薄。(e-l)相对核素为每个metacluster盒直通所示(核素> 0.05%)确定为HD和SP两组:CPUTreg_2 (e),CPUTreg_3 (f),CPUTreg_4 (g), HLA-DR + GITR +清醒T肝细胞(h)、清醒T cell_1(i),清醒T cell_2 (j),清醒T cell_3 (k) n d CD49b清醒T肝细胞(l)。浅蓝色橘色亦然**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon类推标记秩检验。此键适用于所示形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

所示2 常用CITRUS的预测模DF证实，Treg基频的增大是方面缓太快的标志。分级制度门控(a - f)和柑橘深入研究课题(g-k)相比较SP举例来说和给定的HD举例来说在CD4+CD45RA−T肝细胞上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群躯的亦然性所示。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR强调顺利进行分离，虚拟FlowSOM群躯。(b) HD(黑点)和SP(杂色)两组以及ADPSP 606(浅蓝色)之前CD25+ cd127的基频统计所示。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控叔父集的盒直通所示;(c) HLA-DRloGITR−(CPUTreg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(CPUTreg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(CPUTreg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+CPUT cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3强调强度着色，箭头突出新的簇被比对为SP和HD队列间的不同。(j)盒直通所示推测了在SP(杂色)和HD(灰点)两组之前，CITRUS清醒Treg_3和Treg_4的相对核素(%-)。(k)直方所示推测每个簇的表DF(粉红色)和Treg上面相对强调与背景强调(蓝色);上列，CPUTreg_3;后面一行，CPUTreg_4。背景与所有其他簇之前上面的强调有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon类推标记秩检验

所示3 与有益献血者远比，方面缓太快者清醒treg的GITR增大。每个清醒CD4+T肝细胞元簇(清醒T肝细胞_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;CD49b +清醒T肝细胞;HLA-DR + GITR +清醒T肝细胞;CPUTreg_2;CPUTreg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)验证每个强调上面的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的强调热所示(sp606不最主要在内)。(c,d)清醒Treg_4元簇之前所有HD(紫色)、所有SP(蓝色)和SP 606(浅蓝色)的FlowSOM GITR强调接在，推测直方所示(c)和统计所示(d)。Wilcoxon类推标记秩和检验，p< 0.07(浅蓝色)所有ADP最主要，p< 0.05(蓝色)ADPSP 606和给定的HD不最主要在测试之前。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs之前GITR强调，从分级制度门控，从所有HD(紫色)、所有SP(蓝色)和SP 606(浅蓝色)接在，推测直方所示(e)和统计所示(f) *p< 0.05, Wilcoxon类推标记秩检验

所示4 来自缓太快方面的CD4+ treg肝细胞控制现象CD4+T肝细胞的并能减小。SP两组用蓝色的直通和橘色对此，HD两组用黑色的直通和橘色对此，浅蓝色的直通/橘色对此ADPsp606。常用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T肝细胞顺利进行分选。CD4+CD25−(接收者者)被上面为CFSE, Treg按观察的%-滴定。用抗CD3 /28微珠活化肝细胞，人才3天后顺利进行流式肝细胞绝技验证。(a-d)与CD4+接收者者相对应的treg人才(自躯)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD接收者者人才。(a,b,f) CFSE细胞分裂(a,e)和CFSE抑止%-(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑止%-。常用无患儿解读(激活的响应肝细胞不含treg)计算抑止%-。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差深入研究课题。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相比较测试

所示5 现象CD4+T肝细胞对缓太快方面的T肝细胞活化的抑止更敏感。SP两组用蓝色的直通和橘色对此，HD两组用黑色的直通和橘色对此，浅蓝色的直通/橘色对此ADPsp606。常用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T肝细胞顺利进行分选。CD4+CD25−(接收者者)被cfsel上面，treg按观察的%-滴定。用抗CD3 /28微珠活化肝细胞，人才3天后顺利进行流式肝细胞绝技(CD25反染)和肝细胞因叔父深入研究课题。HD Treg与HD、SP或sp606接收者者一同人才。(a,b) CFSE细胞分裂(a)和CFSE抑止前年(b)。(c,d) CD25抑止前年(c)和CD134抑止前年(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共人才之前的强调。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差深入研究课题。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相比较测试

结论：我们证明了的结论是，来自缓太快方面叔父的活化清醒CD4+Treg在GITR强调之前得不到了扩展和比较丰富，强调了进一步研究课题Treg在1DF癌症高风险个躯之前的异质性的必要性。

原文出新处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28